2) Оптимальный водородный показатель – слабощелочная среда ( 7.2-7.4). Исключением является – возбудитель туберкулеза ( 6.2-6.8), холерный вибрион ( 8.5-9.0).
3) Буферность – способность нейтрализовать продукты обмена и поддерживать оптимальный уровень рH.
4) Изотоничность – осмотическое давление питательной среды равно соматическому давлению микробной клетки (0,5% р-р NaCl).
5) Стерильность – отсутствие посторонних м.о.
6) Окислительно- восстановительный потенциал– соотношение веществ способных отдавать и принимать электроны в процессе биохимических реакциях.
7) Унифицированность – наличие примерно одинакового набора компонентов, что обеспечивает возможность культивировать большое количество видов м.о.
8) Прозрачность – степень просматриваемости на свету, обеспечивает возможность изучения характера, объема роста м.о. на питательной среде через определенный промежуток времени.
Исходным сырьём для большинства сред- заводские полуфабрикаты, растворимые и животные продукты ( сыворотки, молоко, кровь, уголь и т.д.).
Этапы приготовления сред:
1) Варка на водяной бане, на открытом огне или в варочных котлах подогреваемых паром.
2) Установка оптимального рH с помощью индикаторных бумажек или специальными пробами (иномерами), корректировка рH среды при «+» растворов кислот и щелочей.
3) Осветление с помощью яичного белка для сред, которые при варке мутнеют или темнеют.
4) Фильтрация жидких и расплавленных сред через ватно-марлевый фильтр или путём отстаивания.
5) Розлив сред по пробиркам, флаконам, колбам и т.п.
6) Стерилизация зависит от состава среды и проводится в автоклавах, на водных банях или в свертывателе Коха (это металлический цилиндр, обшитый снаружи материалом (линолеум, асбест), плохо проводящим тепло. На дно наливают воду, а стерилизующий материал помещают сверху на подставку. Аппарат закрывают конической крышкой, в которой имеются отверстия для термометра и выхода пара. Внизу расположен кран для спуска воды. Стерилизацию проводят текучим паром при 100 °С в течение 30-60 мин. При таком режиме погибают вегетативные клетки спорообразующих и неспорообразующих форм микробов. В аппарате Коха стерилизуют те материалы, которые не выдерживают температуру выше 100 °С (желатин, молоко, углеводные среды и др.).
Белковые среды и сыворотку крови, не переносящие температуру 100 °С, стерилизуют дробно при 56-58 °С в водяной бане).
7) Контроль проводится с целью подтверждения стерильности и оптимальности рH.
Алгоритм приготовления простых питательных сред:
1) Мясопептонныйбульон (МПБ):
А) К мясной воде «+» 1% пептон, 0.5 частей NaCl.
Б) Кипятят на слабом огне 10-15 минут до растворения веществ.
В) Оптимизируют рH, снова кипятят 30-40 минут, до выпадения осадка.
Г) Фильтруют, доливают до первоначально объема водой.
Д) Стерилизуют 20 минут при 120°С.
2) Мясопептонный агар (МПА):
А) К МПБ до или после стерилизации»+» 2-3% измельченного агар-агара.
Б) Кипятят, помешивая на слабом огне до полного расплавления агара. Можно варить в аппарате Коха или в автоклаве.
В) При необходимости готовую среду осветляют (яичный желток).
Г) Фильтруют, стерилизуют 20 минут при 120°С.
3) Желатиновый столбик – простая среда, в пробирке нужна для определения протеолитических свойств бактерий (расщепление белка). Разжижение желатина – протеолитическая активности.
4) Хромотогеные среды (ХС)– питательные среды, позволяющие по окраске колонии делать предварительные заключения о виде выделенного м.о.
Принцип действия ХС– реактивы в составе среды, взаимодействуют с ферментами м.о. специфичными только для этого вида с образованием окрашенных веществ.
Алгоритмы приготовления сложных питательных сред:
1) Среда с углеводами:
А) Сахарный бульон (СБ)– сложная жидкая питательная среда:
1) К МПБ нейтральной реакции «+» 0.25-2% глюкозы (растворяют в небольшом количестве дистиллированной воде).
2)Стерилизуют три дня подряд по 30 мин или однократно в автоклаве при 115°С 30 мин.
Б) Сахарный агар (СА) – сложная плотная питательная среда:
1) КМПА «+» 0.5-2% глюкозы (растворяют в небольшом количестве дистиллированной воде).
2) Стерилизуют три дня подряд по 30 мин или однократно в автоклаве при 115°С 15 мин.
