Подготовка объектов для обоих методов практически идентична. Пятна крови на вещественных доказательствах и контрольные участки предметов-носителей экстрагируют стерильным физиологическим раствором при температуре +4–6 °C в течение 18–72 часов. При изучении труднорастворимых пятен крови время экстрагирования продлевают до 4–5 суток. Белки в пятнах из следов крови или другого объекта доводят до приблизительного содержания 1:1000 под контролем пробы Геллера с азотной кислотой.
При работе с пятнами малых размеров в реакции электропреципитации можно использовать ниточки из пятен крови размерами 0,1 × 0,1 см.
Постановка реакции преципитации в жидкой среде: в конические пробирки с соответствующими надписями помещают вытяжки из пятен крови, антиген и изотонический раствор натрия хлорида. В каждый объект исследования наслаивают преципитирующую сыворотку, чтобы отношение антигена и антитела составляло 1:10. Наблюдение ведут в течение часа, отмечая время появления преципитата. Положительным результатом реакции считается выпадение колец преципитата в пробирках с вытяжками из пятен крови и в пробирках с антигенами при отсутствии таковых в пробирках с вытяжками из предмета-носителя и физиологического раствора.
Техника проведения реакции электропреципитации заключается в следующем: расплавленный 1-процентный агаровый гель выливают на стеклянную пластинку, равномерно распределяя по всей площади, охлаждают, дают подсохнуть и уплотниться в течение 10–15 мин. Далее в геле пробивают стандартным пробойником по два параллельных ряда отверстий диаметром 0,3 см по трафарету, расположенному под пластинкой. Гель из отверстий удаляют препаровальной иглой. В отверстия одного ряда помещают преципитирующие сыворотки, в отверстия второго ряда – вытяжки из следов крови или ниточки с кровью. Таким же образом вводят контрольные участки предметов-носителей.
Положительный результат электропреципитации с одной сывороткой контролируют отрицательным результатом с двумя другими преципитирующими сыворотками. При отрицательном результате со всеми вышеуказанными сыворотками реакцию проводят дополнительно с другими преципитирующими сыворотками. Разделение исследуемых объектов производят на универсальном приборе для электрофореза при напряжении 250–300 V, силе тока 30–32 мА и комнатной температуре в течение 20–35 мин. Пластину сохраняют во влажной камере и результаты учитывают в течение суток.
Следующий этап работы эксперта – это определение групповой принадлежности крови. Обычно начинают с последовательного исследования образцов крови проходящих по делу лиц по системе АВО, присланных в жидком или высушенном виде на (марле).
Исследование образцов жидкой крови проходящих по делу лиц по системе АВО в судебно-медицинской экспертизе мало чем отличается от исследования таковой в клинике. Принцип исследования следующий: эритроциты изучаемой крови испытываются стандартными группоспецифическими сыворотками анти-А и анти-В. Сыворотка крови исследуется со стандартными эритроцитами группы А и В. В итоге группоспецифические сыворотки открывают искомые антигены, а стандартные эритроциты – соответствующие агглютинины. Далее приступают к определению групповой принадлежности следов крови на вещественных доказательствах по системе АВО, чаще всего используя реакцию абсорбции-элюции (РАЭ). Суть этого метода заключается в следующем: в первой фазе реакции-абсорбции к пятну крови добавляют стандартную группоспецифическую сыворотку. Агглютинины этой сыворотки абсорбируются соответствующим антигеном крови. Потом охлажденным физиологическим раствором проводят отмывание в целях удаления свободных неабсорбированных антител. При этом не нарушается возникшая взаимосвязь антигена пятна крови с антителами. Во второй фазе реакции абсорбции-элюции производят разделение образовавшегося комплекса «антиген-антитело» путем нагревания, в результате которого происходит разрушение связи антигена с антителами и, соответственно, выход абсорбированных ранее антител в соответствующую жидкую среду. Характер элюированных антител устанавливают по агглютинации в препаратах с контрольными участками предметов-носителей. Допустим, агглютинация стандартных эритроцитов группы В (при отсутствии агглютинации стандартных эритроцитов группы А) говорит, что в исследуемом объекте (пятне крови) имеется антиген В и отсутствует антиген А. В настоящее время для определения антигенов системы АВО гораздо реже используют реакцию абсорбции в количественной модификации и еще реже – реакцию смешанной агглютинации.
Учитывая, что диагноз группы крови ставится в первую очередь на основании выявленных антигенов, определение антител (агглютининов) является дополнительным методом, но, при достаточных размерах пятна, всегда обязательным. Наиболее распространенным является метод покровного стекла по Ляттесу. Суть метода в следующем: кусочки из пятна крови помещаются на 3 предметных стекла, слева – буква «А», справа – буква «В», на третьем стекле – букв
