Главный алтарь храма освящен 20 ноября 1842 г. во имя Введения во Храм Пресвятой Богородицы; тогда же освятили и приделы во имя Св. Благоверного Князя Александра Невского и Св. Захария и Елизаветы. Главными святынями храма стали полковые иконы Спаса Нерукотворенного образа и иконы Божией Матери «Знамения», бывшие с полком в битвах при Лесной и при Полтаве в 1709 г. В храме висели парадные знамена и доски с именами павших в боях офицеров, хранились полковые мундиры российских императоров и фельдмаршальский жезл великого князя Николая Николаевича-старшего. Здесь же собирались военные реликвии: трофейные знамена, ключи от взятых крепостей, образцы амуниции и снаряжения. На стенах центрального престола находились мраморные доски с именами павших в боях офицеров, панихиды по которым проходили в день полкового праздника. С конца XIX в. в храме начали размещать личные награды, документы и портреты особо отличившихся и павших в сражениях Семеновских офицеров и солдат. Храм продолжал получать богатые подарки: в 1877 г. храму было пожертвовано оригинальное, сделанное из перламутра «Введение»; в 1914 г. иерусалимский патриарх Дамиан подарил образ Воскресения Христова с частицей Гроба Господня. Гробницу для плащаницы изготовил в 1888 г. из золоченой бронзы известный мастер И.В. Софронов, сама же плащаница была отбита семеновцами у французов, похитивших ее из древнего московского храма. Праздничное Евангелие весило 2,5 пуда, потому что в 1796 г. оно все было обложено золоченым серебром и украшено драгоценными камнями.
В западной части храма находились гробницы командиров полка князя П.М. Волконского и графа В.П. Клейнмихеля. В 1906 г. в крипте был устроен придел, где были погребены командир полка Г.А. Мин, убитый террористами, и трое семеновцев, погибших при подавлении вооруженного восстания в Москве. Там же хоронили и офицеров полка, павших на полях сражений Первой мировой войны. В конце 1916 г. В.Н. Бобров сделал проект мраморного иконостаса в память погибших в Первую мировую войну офицеров, которых хоронили в нижней церкви.
С 1873 г. при храме существовало благотворительное общество, которое содержало богадельню и школу-приют для бедных девочек.
«Благодаря обилию богатых прихожан, купцов из Апраксина рынка и Гороховой, щедрых на украшение храма и благотворительность, среди других военных церквей он занимал исключительно счастливое положение. Полк давал причт, один из лучших в Петербурге церковных хоров, несколько сторожей и, в случае нужды, любое количество рабочих рук для чистки, поправок, починок и т. д. Приход, <территорию которого ограничивали Загородный и Забалканский проспекты и Обводный канал, где традиционно селились выходцы из Ярославской губернии>, с своей стороны, не только не жалел денег на храм и на всех, кто его обслуживал, но содержал богадельню, детский приют, ночлежный дом и даровую столовую, оказывая, кроме того, многим неимущим прихода помощь – и натурой, и деньгами».
В 1850 г. по проекту архитектора А.Я. Фарафонтьева рядом с церковью в Лазаретном переулке построили дом причта; позже здесь находился приходский дом для бедных. В 1913 г. полковая церковь стала собором. К храму были приписаны три часовни: на Загородном, напротив Семеновских казарм, имевшая вид мраморного киота и освященная в 1885 г. (арх. Н.В. Набоков); рядом с храмом – во имя Св. Александра Невского, в память спасения в Борках, выстроенная в 1893–1894 гг. (арх. С.А. Баранкеев); шатровая, слева от вокзала, освященная в 1898 г. в память о спасении цесаревича Николая Александровича в Отсу.
Метрические книги Введенской церкви хранятся в Российской национальной библиотеке (фонд 1435, 1900–1914 гг.) и в Центральном Государственном архиве Санкт-Петербурга.
От названия храма происходит и улица Введенского канала (ранее – набережная канала, соединявшего реку Фонтанку и Обводный). Рядом с церковью располагался и полковой госпиталь (Лазаретный пер., 2; 1799 г.; арх. Ф.И. Демерцов), ныне – Военно-медицинский музей. В 1907 г. проведена реставрация. Последним до революции настоятелем собора был с 1908 г. прот. Александр Иоаннович Алексеев. В марте 1932 г. Введенская церковь закрыта, к марту 1933 г. снесена, на ее месте разбит сквер.
