В другом исследовании (Minoo et al., 1997) оценивался перенос эксплантов на среду МС, содержащую различные уровни цитокинина (БА) и ауксина (индолмасляная кислота, ИМК), для пролиферации (таблица 5.1). Инициирование роста уже существующих почек in vitro может быть индуцировано в среде МС с низким содержанием цитокинина. Однако, комбинация цитокининов и ауксина способствовала образованию множественных побегов. Идеальной средой для размножения была МС с добавлением БА (1 мг/л) и ИМК (0,5 мг/л). В этой среде за 90 дней культивирования индуцировалось в среднем 15 множественных побегов (рис. 5.4). Узловые сегменты давали лучший ответ: в среднем 15 побегов на культуру по сравнению с кончиками побегов, которые давали в среднем семь побегов на культуру (Minoo, 2002). Питательные среды и условия, благоприятные для микроразмножения V. planifolia, подходили для других родственных видов, таких как V. andamanica, V. aphylla (рис. 5.5) и V. pilifera. Количество индуцированных побегов у разных видов варьировало (таблица 5.2). Примерно 12-15 побегов на культуру могут быть индуцированы у V. planifolia, и 8-10 побегов у V. aphylla. Среди изученных видов наименьшая скорость размножения наблюдалась у V. pilifera. Удлиненные побеги, из среды для пролиферации, укореняли на среде МС, содержащей 30 г/л сахарозы, без регулятора роста (рис. 5.6). Приживаемость проростков с хорошо развитыми корнями in vitro составила более 70%. Возникновение корней на микрочеренках начиналось между четырьмя и шестью днями после культивирования, достигая 100% культуры через две недели, что указывает на то, что оптимальные эндогенные уровни регуляторов роста растений, необходимых для укоренения, уже присутствовали в ткани/эксплантатах.

ТАБЛИЦА 5.1. Влияние регуляторов роста на индукцию множественных побегов и корней из экспланта побега V. planifolia на среде МС (среднее из 20 повторов)
Концентрация регуляторов ростаЧастота множественных побегов (%)Среднее количество всходов/культура ± станд.откл.Развитие корней/Культура
KinBANAAIBANo.Тип
0.50.0
1.00.0
0.571 ± 3.454.18 ± 0.30
1.020 ± 3.631.0
0.50.01.01веламен
1.00.01.01веламен
0.50.01.01длинные корни
1.00.01.01длинные корни
0.50.50.01.0
1.00.50.01.0
0.51.00.01.0
0.50.50.01.01веламен
1.00.50.01.01разветвление
0.51.00.01.01веламен
0.50.50.01.01
1.00.50.01.01
0.51.00.01.01
0.50.50.01.01
1.00.597 ± 6.515.15 ± 3.63
0.51.065 ± 11.410.35 ± 3.45
0.01.01здоровые корни

БА = бензиладенин, ИМК = индол-3-масляная кислота, Кин = кинетин, НУК = α-нафталинуксусная кислота.

ТАБЛИЦА 5.2. Сравнение откликов in vitro у разных видов Vanillaa
Перейти на страницу:

Похожие книги